Resultado da pesquisa (3)
Termo utilizado na pesquisa diagnóstico laboratorial
#1 - Influence of euthanasia, the intensity of inflammatory lesion and viral load in the laboratory diagnosis of rabies in cattle
Abstract in English:
This research reports the use of different diagnostic tests in cattle, naturally infected by Rabies lyssavirus (RABV), and correlates the positivity of the tests with the clinical moment of euthanasia, the intensity of the inflammatory lesion and viral load. It also highlights the possibility of euthanasia in early stages of the disease as a way to improve animal welfare. For that, samples of 34 bovine brains were collected for analysis, preserved in 10% buffered formaline and refrigerated with subsequent freezing. The samples were subjected to direct immunofluorescence antibody technique (DFAT) tests, viral isolation in cell culture (VICC), histopathology with hematoxylin and eosin staining (HE), immunohistochemistry (IHC), Shorr stainied neural tissue smears (DSS), Reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) and polymerase chain reaction by quantitative reverse transcriptase (qRT-PCR). The areas used for analysis were the cerebellum, parietal telencephalon and thalamus. Samples with Negri bodies (NBs) or immunostaining in at least one of the analyzed areas were considered positive. For the study of the intensity of histological lesions, the lesions were classified into grades 0, 1, 2 and 3 and the positivity of the test in the presence or absence of NBs in one of the three areas analyzed. To verify the influence of the disease clinical evolution, 4-four groups of analysis were created according to the animal’s clinical status at moment of the euthanasia, being: M1 = animal euthanized while standing, M2 = euthanized when in sternal recumbence, M3 = euthanized when in lateral recumbence, M4 = animal with natural death. Of the 34 brains evaluated, IHC was positive in 100% of cases, DFAT was positive in 97.05% of them, and in this negative sample the presence of RABV was confirmed by VICC. NBs ere seen in 88.23% of the cases, and the DSS test was positive in 82.35% of them. All diagnostic techniques showed positive cases in all groups analyzed. Each case was positive in at least two diagnostic methods. All cases that contained NBs were positive for rabies in the other tests. In this study, it was observed that the variables analyzed (intensity of injury and clinical evolution at the moment of euthanasia) had an influence only on HE and DSS techniques, which are based on NB research to form the diagnosis, but did not interfere with the effectiveness of the diagnosis performed by detecting the viral antigen performed by DFAT and IHC. All isolated RABV samples included in the present study have a genetic lineage characteristic of hematophagous bats Desmodus rotundus. The evaluation of qRT-PCR showed that the amount of virus did not interfere in the positivity of the tests. This work shows that IHC and DFAT are safe diagnostic techniques. They are capable of detecting RABV even in euthanized animals in the early stages of clinical evolution with mild intensities of histological lesions.
Abstract in Portuguese:
Esta pesquisa relata a utilização de diferentes testes de diagnóstico em bovinos, naturalmente infectados pelo Rabies lyssavirus (RABV), e correlaciona a positividade dos testes com o momento clínico da eutanásia, a intensidade da lesão inflamatória, e a carga viral. Salienta também a possibilidade da eutanásia em estágios precoces da doença como forma de melhorar o bem-estar animal. Para isso amostras de 34 encéfalos bovinos foram coletados para análise, conservadas em formol tamponado 10% e sob refrigeração com posterior congelamento. As amostras foram submetidas aos testes de imunofluorescência direta (IFD), isolamento viral em cultivo de células (IVCC), histopatologia com coloração de hematoxilina e eosina (HE), imuno-histoquímica (IHQ), esfregaço direto com coloração de Shorr (EDS), reação da polimerase em cadeia por transcriptase reversa (RT-PCR) e reação da polimerase em cadeia por transcriptase reversa quantitativo (qRT-PCR). As áreas utilizadas para análise foram o cerebelo, telencéfalo parietal e tálamo. Foram consideradas positivas as amostras que apresentaram Corpúsculo de Negri (CNs) ou imuno-marcação em ao menos uma das áreas analisadas. Para o estudo da intensidade das lesões histológicas, as lesões foram classificadas em graus 0, 1, 2 e 3 e a positividade do teste na presença ou ausência de CN em uma das três áreas analisadas. Para verificar a influência da evolução clínica da doença foram criados 4 grupos de análise conforme o estado clínico do animal no momento da eutanásia, sendo: M1 = animal eutanasiado em estação, M2 = eutanasiado em decúbito esternal, M3 = eutanasiado em decúbito lateral, M4 = animal com morte natural. Dos 34 encéfalos avaliados a IHQ foi positiva em 100% dos casos, a IFD foi positiva em 97,05%, sendo que na amostra negativa a presença de RABV foi confirmada por IVCC. A histologia com HE, através da visualização das CNs, foi positiva em 88,23 % dos casos, e o teste de EDS, foi positivo em 82,35%. Todas as técnicas de diagnóstico apresentaram casos positivos em todos os grupos analisados. Cada caso foi positivo em, pelo menos, dois métodos de diagnóstico. Todos os casos que continham CN foram positivos para raiva nos demais testes. Nesse estudo observou-se que as variáveis analisadas intensidade de lesão e evolução clínica no momento da eutanásia tiveram influência somente nas técnicas de HE e EDS, que se baseiam na pesquisa do CN para formação do diagnóstico, mas não interferiram na eficácia do diagnóstico realizado através da detecção do antígeno viral realizado por IFD e IHQ. Todas as amostras RABV isoladas incluídas no presente estudo apresentam linhagem genética característica de morcegos hematófagos Desmodus rotundus. A avaliação de qRT-PCR demostrou que a quantidade de vírus não interferiu na positividade dos testes. Esse trabalho mostra que a IHQ e a IFD são técnicas seguras de diagnóstico e que mesmo em animais eutanasiados em estágios iniciais de evolução clínica com intensidades leve de lesões histológicas, são capazes de detectar o RABV.
#2 - Experimental type C botulism in goats
Abstract in English:
The present paper describes the subcutaneous inoculation of goats with botulinum toxin type C to determine the doses required to cause various clinical signs, and to evaluate the bioassay as a means of laboratory confirmation of the diagnosis of botulism. Serial double dilutions in doses ranging from 15.6 to 500 DL50/kg were administered to 6 goats. The animals were checked daily to observe development of characteristic signs. Blood and liver samples were collected to detect the toxin by bioassay in mice. Doses of 500 and 250 DL50/kg induced acute botulism, death occurring between 42 and 46 hours post-inoculation, but the toxin was only detected in serum samples taken from the goat which received the larger dose. Animals inoculated with doses of 125, 62.5 and 31.3 DL50/kg developed the sub-acute forro, but the toxin could not be detected in their blood serum. The chronic forro of botulism was observed in those which received 15.6 DL50/kg doses and the toxin could not be demonstrated either in their serum samples. The results confinn that goats are highly susceptible to botulinum type C toxin and that these animals develop the sarne clinical signs as seen in bovines.
Abstract in Portuguese:
O objetivo do presente trabalho foi reproduzir o botulismo em caprinos, induzido pela toxina tipo C e determinar as doses para desenvolver as diferentes formas clínicas, bem como para avaliar a eficácia do bioensaio em camundongos. Foram utilizados 6 caprinos, inoculados por via subcutânea com a toxina tipo C, em doses de 500 a 15,6 DL50/kg de peso vivo, em diluições duplas seriadas. Os animais foram observados quanto ao desenvolvimento de sintomatologia característica de botulismo e amostras de soro sanguíneo e fígado foram coletadas para pesquisa da toxina pelo bioensaio em camundongos. As doses de 500 e 250 DL50/kg induziram quadro agudo de botulismo evoluindo para a morte entre 42 e 46 horas pós-inoculação. A toxina foi detectada somente no soro do animal que recebeu a dose de 500 DL50/kg. Os animais que receberam as doses de 125, 62,5 e 31,3 DL50/kg desenvolveram quadro subagudo da doença, não sendo detectado a toxina nas amostras analisadas. Observou-se quadro crônico de botulismo no animal inoculado com a dose de 15,6 DL50/kg, não se constatando a presença da toxina no soro. Os resultados confirmaram a alta susceptibilidade dos caprinos à toxina botulínica tipo C, que apresentaram quadros clínicos semelhantes aos observados em bovinos.
#3 - Diagnosis of botulismo of cattle in Brazil by micro-complement fixation
Abstract in English:
The heat induced micro-complement-fixation test was used for the laboratory diagnosis of botulism in cattle. The following specimens were collected in southeastem and central-westem Brazil: Thirty six samples of blood serum, liver and rumen liquid from 23 bovines with clinical signs of botulism (a condition commonly called "doença da vaca caída" - fallen cow disease) and from 1 bovine inoculated subcutaneously with botulinum type C toxin. Samples of blood serum, liver and rumen liquid collected from healthy bovines were used as negative controls. Sixteen out of 17 serum samples were positive for botulinum toxin in cattle with clinical signs of acute, subacute and chronic botulism. All 9 liver samples were positive including those from chronic cases. Two samples of rumen liquid from bovines with the acute disease gave a positive test, but 2 other chronic cases were negative. All 3 samples collected from the bovine with subacute clinical sigos gave positive results. From 36 samples examined, 31 were positive; of these 2 were of type C, 5 type D and 24 samples had to be grouped within the CD complex. All samples gave negative results with the mouse bioassay, including the material collected from the experimental case. In conclusion at least one sample of each of the 24 cases examined gave a positive result for botulinum toxin; thus this highly sensitive test confirmed the diagnosis that the "doença da vaca caída" is indeed botulism, caused by type C and D toxins.
Abstract in Portuguese:
Foi utilizada a técnica de Microfixação de Complemento Induzida pelo Aquecimento para o diagnóstico laboratorial do botulismo em bovinos. Neste sentido foram colhidas, nas regiões Sudeste e Centro-Oeste do Brasil, 36 amostras constituídas por soro sangüíneo, fígado e líquido ruminal de 23 bovinos com quadro clínico de botulismo, vulgarmente conhecido como “doença da vaca caída”, e de 1 bovino intoxicado experimentalmente pela toxina botulínica tipo C. Como controle negativo foram utilizados soro sangüíneo, fígado e líquido ruminal de bovinos sadios. De 17 soros examinados de bovinos com quadros clínicos agudo, subagudo e crônico, 16 foram positivos para a presença de toxina; todas as 9 amostras de fígado também foram, positivas, mesmo de animais com intoxicação crônica. Duas amostras de líquido ruminal de bovinos com doença aguda foram, positivas no teste, enquanto 2 amostras colhidas de animais com evolução crônica foram negativas. As 3 amostras oriundas do bovino intoxicado experimentalmente e apresentando evolução subaguda, foram positivas na Microfixação. Das 36 amostras examinadas, 31 foram positivas no teste, sendo 2 pertencentes ao tipo C, 5 ao tipo D, e 24 agrupadas dentro do complexo CD. Todas essas amostras foram negativas no Bioensaio em camundongo, inclusive o material colhido do bovino intoxicado experimentalmente. Com base nos resultados, e tendo como referência o Bioensaio em camundongo, a Microfixação de Complemento demonstrou um excelente desempenho, permitindo o diagnóstico laboratorial de botulismo em pelo menos um material de cada um dos 24 casos examinados, confirmando assim o diagnóstico de que a "doença da vaca caída" é de fato botulismo causado pelas toxinas C e D.
